Data Teknis
Petunjuk penggunaan kolom/pelat untuk desalinasi c18
Pengenalan Produk
Kolom/pelat desalinasi C18 diisi dengan matriks gel silika C18, yang gugus fungsinya, oktadesil, memiliki sifat hidrofobisitas tinggi dan sifat retensi yang sangat baik untuk senyawa nonpolar. Kolom/pelat desalinasi C18 dapat menyerap molekul primer/oligo/DNA dengan DMT tanpa retensi garam, sehingga menghasilkan produk primer/oligo/DNA dengan kemurnian tinggi.
Panduan Pemilihan
BM Life Sciences menawarkan kolom/pelat desalinasi C18 dalam berbagai ukuran, dan Anda dapat memilih kolom desalinasi yang tepat berdasarkan konsentrasi primer/oligo. Untuk pemrosesan batch, Anda dapat memilih pelat desalinasi 96-sumur.
| Nomor Produk | norma | Spesifikasi oligonukleotida yang berlaku | Langkah referensi |
| SPESIFIKASI18W150 | 50mg/1ml | 10nmol - 200nmol | Langkah 5 |
| SPESIFIKASI18W3100 | 100mg/3ml | 10nmol - 600nmol | Langkah 1 |
| SPESIFIKASI18W3300 | 300mg/3ml | 10nmol - 2.opmol | Langkah 2 |
| SPESIFIKASI18W61000 | 1 gram/6 ml | 1 umol - 6 umol | Langkah 3 |
| SPESIFIKASI18W9630 | pelat 30mg/96 sumur | 5nmol - 100nmol | Langkah 4 |
| SPESIFIKASI18W9650 | pelat 50mg/96 sumur | 10nmol - 200nmol | Langkah 4 |
| SPE15C18W9680 | Plat 80mg/96-sumur (plat 1,5ml 96-sumur) | 10nmol - 500nmol | Langkah 5 |
| SPE23C18W9680 | Plat 80mg/96 sumur (plat 96 sumur 2,3ml) | 10nmol - 500nmol | Langkah 5 |
Catatan
Kolom/Pelat Pembersih C18 juga dapat menghilangkan garam pada produk mentah dan primer/oligo setelah pemurnian HPLC dan PAGE, lihat langkah 5 untuk detailnya.
Reagen
Asetonitril Kelas Kromatografi
0,1 M TEH, PH7,0
NaCl 0,5M
Larutan pembilasan (5% asetonitril dilarutkan dalam 0,5 M Nacl)
3% asam trifluoroasetat (TFA)
Air deionisasi
20% asetonitril
Penyangga TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8,0
Langkah 1
Persiapan Sampel
Tambahkan 0,5 M NacI ke sampel oligonukleotida hingga volume 2 mL.
Mengaktifkan kolom desalinasi
Aktivasi: 1 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan kolom.
Penyeimbangan: Seimbangkan kolom dengan 1 mL larutan TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Proses pembersihan
1. Lewatkan 2 mL larutan yang mengandung oligonukleotida melalui kolom desalinasi.
2. Bilas kolom 2 kali dengan 1 mL larutan pembilasan untuk menghilangkan urutan yang tidak berhasil.
3. Bilas kolom 2 kali dengan 1 ml air deionisasi untuk menghilangkan garam.
4. Bilas kolom 2 kali dengan 1 ml asam trifluoroasetat 3% untuk menghilangkan DMT dan amati bahwa lapisan yang teradsorpsi berubah menjadi oranye-merah; dan
5. Bilas kolom desalinasi dua kali dengan 1 mL air deionisasi untuk menghilangkan asam trifluoroasetat dan garam sisa.
6. Elusi 1 ml asetonitril 20% dan rakit.
Langkah 2
Persiapan Sampel
Tambahkan 0,5 M NacI ke sampel oligonukleotida hingga volume 4 mL.
Mengaktifkan kolom desalinasi
Aktivasi: 2 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan kolom.
Penyeimbangan: Seimbangkan kolom 2 mL dengan 0,1 M TEAA (PH 7,0).
Proses pembersihan
1. Lewatkan 4 mL larutan yang mengandung oligonukleotida melalui kolom desalinasi.
2. Bilas kolom 2 kali dengan 2 ml larutan pembilasan untuk menghilangkan urutan yang tidak berhasil.
3. Bilas kolom 2 kali dengan 2 ml air deionisasi untuk menghilangkan garam ;)
4. Bilas kolom 2 kali dengan 2 ml asam trifluoroasetat 3% untuk menghilangkan DMT, lapisan adsorpsi telah berubah menjadi oranye-merah.
5. Bilas kolom dengan air demineralisasi dua kali dengan 2 mL air deionisasi untuk menghilangkan asam trifluoroasetat dan garam sisa.
6. Elusi 2 ml asetonitril 20% dan rakit.
Langkah 3
Persiapan Sampel
Tambahkan 0,5 M Nac ke sampel oligonukleotida hingga volume 10 mL.
Mengaktifkan kolom desalinasi
Aktivasi: 5 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan kolom.
Penyeimbangan: Kolom diseimbangkan dengan 10 mL TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Proses pembersihan
1. 10 mL larutan yang mengandung oligonukleotida dilewatkan melalui kolom desalinasi.
2. Kolom dicuci dua kali dengan 5 mL larutan pembilasan untuk menghilangkan urutan yang tidak berhasil.
3. Bilas kolom dua kali dengan 5 mL air deionisasi untuk menghilangkan garam.
4. Cuci kolom dua kali dengan 5 mL asam trifluoroasetat 3% untuk menghilangkan DMT dan perhatikan bahwa lapisan adsorpsi telah berubah menjadi oranye-merah.
5. Bilas kolom dua kali dengan 5 ml air deionisasi untuk menghilangkan asam trifluoroasetat dan residu garam.
6. Elusi 5 ml asetonitril 20% dan kumpulkan.
Langkah 4
Persiapan sampel
Tambahkan 0,5 M Nacl ke sampel oligonukleotida hingga volume 0,5 mL.
Aktivasi pelat 96 sumur
Aktivasi: 0,5 mL asetonitril dialirkan melalui setiap sumur pelat 96 sumur.
Keseimbangan: Seimbangkan pelat 96 sumur dengan 0,5 mL larutan TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Prosedur pembersihan
1. Lewatkan 0,5 mL larutan yang mengandung oligonukleotida melalui pelat 96 sumur.
2. Bilas pelat 96 sumur 2 kali dengan 0,5 mL larutan pencuci untuk menghilangkan urutan yang buruk.
3. Bilas pelat 96 sumur 2 kali dengan 0,5 mL air deionisasi untuk menghilangkan garam.
4. Cuci pelat 96 sumur 2 kali dengan 0,5 ml asam trifluoroasetat 3% untuk menghilangkan DMT, dan amati bahwa lapisan adsorpsi berubah menjadi oranye-merah; dan
5. Bilas pelat 96 sumur dua kali dengan 0,5 mL air deionisasi untuk menghilangkan asam trifluoroasetat dan residu garam.
6. Elusi 0,5 ml asetonitril 20% dan kumpulkan bahannya.
Langkah 5
Persiapan sampel
Tambahkan 0,5 M Nacl ke sampel oligonukleotida hingga volume 1,2/2 mL.
Aktivasi pelat 96 sumur
Aktivasi: Lewatkan 1-4 ml 0,5 mL asetonitril melalui setiap sumur pelat 96 sumur.
Penyeimbangan: Seimbangkan pelat 96 sumur dengan 1-4 mL larutan TEAA 0,5 mL 0,1 M (PH 7,0).
Proses pembersihan
1. Lewatkan 0,5-2 mL larutan yang mengandung oligonukleotida melalui pelat 96 sumur.
2. Bilas pelat 96 sumur sebanyak 2 kali dengan 1/2 mL larutan pencuci untuk menghilangkan urutan yang tidak diinginkan ;)
3. Bilas pelat 96 sumur dua kali dengan 1/2 mL air deionisasi untuk menghilangkan garam.
4. Cuci pelat 96 sumur sebanyak 2 kali dengan 1/2 ml asam trifluoroasetat 3% untuk menghilangkan DMT, dan amati bahwa lapisan adsorpsi berubah menjadi oranye-merah;
5. Bilas pelat 96 sumur dengan 1/2 mL air deionisasi 2 kali untuk menghilangkan asam trifluoroasetat dan residu garam.
6. Elusi 1/2 ml asetonitril 20% dan kumpulkan bahannya.
Langkah 6
Reagen
Asetonitril Kelas Kromatografi
0,05 M TEH, PH 7,0
Teh 2M, PH 7.0
Air deionisasi (untuk desalinasi dan pemurnian molekul RNA tanpa RNase) 60% asetonitril (dilarutkan dalam air yang mengandung 0,5% NH4OH)
20% asetonitril (untuk menghilangkan garam pada molekul DNA atau RNA setelah deproteksi)
Penyangga TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8,0
Persiapan Sampel
Oligo yang dimurnikan dengan HPLC: Tambahkan TEAA 0,1 M dalam jumlah yang sesuai ke oligo yang dimurnikan dengan HPLC sehingga konsentrasi asetonitril akhir adalah ≤5%. Oligo yang dimurnikan: Larutkan fragmen gel yang mengandung oligonukleotida dalam TEAA 0,05 M, singkirkan fragmen gel, larutkan oligo dalam setidaknya 2 mL TEAA 0,1 M.
Oligo yang dilarutkan dalam NH4OH atau AMA: Uapkan hingga kering dan larutkan dalam 2 mL TEAA 0,1 M.
Mengaktifkan Pompa Desalinasi
Aktivasi: 1 mL asetonitril digunakan untuk mengaktifkan kolom.
Penyeimbangan: Seimbangkan kolom TEAA 1 mL 2 M (pH 7,0).
Prosedur desalinasi oligos untuk pemurnian HPLC
1. Lewatkan larutan yang mengandung oligonukleotida melalui kolom desalinasi.
2. Bilas kolom desalinasi dua kali dengan 1 mL air deionisasi untuk menghilangkan garam.
3. Elusi melalui kolom 1 ml asetonitril 60% dan kumpulkan.
Prosedur desalinasi oligosakarida dimurnikan dengan metode PAAG
1. Lewatkan larutan yang mengandung oligonukleotida melalui kolom desalinasi.
2. Bilas kolom desalinasi dua kali dengan 1 mL air deionisasi untuk menghilangkan garam.
3. Elusi melalui kolom 1 ml asetonitril 60% dan kumpulkan.
Prosedur untuk menghilangkan garam dari oligon DNA setelah sintesis
1. Lewatkan larutan yang mengandung oligonukleotida melalui kolom desalinasi; dan
2. Bilas kolom TEAA 1 mL 0,1M dua kali untuk menghilangkan urutan yang tidak berhasil.
3. Bilas kolom desalinasi dua kali dengan 1 ml air deionisasi untuk menghilangkan garam.
4. Lewatkan kolom melalui 1 ml asetonitril 20% dan rakit.
Prosedur desalinasi oligo RNA setelah sintesis
1. Lewatkan larutan yang mengandung oligonukleotida melalui kolom desalinasi.
2. Bilas kolom dengan 2 ml TEAA 0,1 M.
3. Bilas kolom dengan 2 mL air bebas RNase.
4. Lewatkan 2 ml asetonitril 20% (air bebas RNase) melalui kolom, elut dan kumpulkan. Penyimpanan Oligonukleotida
Oligonukleotida yang dilarutkan dalam 20% asetonitril dan disimpan pada suhu 4°C mencegah pertumbuhan mikroorganisme dan cocok untuk penyimpanan jangka pendek.
Oligonukleotida dalam larutan asetonitril 20% (atau dilarutkan dalam penyangga alkali seperti TE) dapat disimpan dalam jangka waktu lama pada suhu serendah -20 °C.
Oligonukleotida dalam bentuk bubuk beku-kering dapat disimpan dalam jangka waktu lama.
Peringatan
Jumlah reagen yang digunakan hanyalah rekomendasi dan harus dioptimalkan dalam setiap kasus tertentu.
Jumlah reagen yang digunakan hanyalah rekomendasi dan harus dioptimalkan berdasarkan kasus per kasus.
Kolom desalinasi harus mengalami kesetimbangan aktivasi yang cukup untuk mengeluarkan residu pada kolom/pelat dan meningkatkan kapasitas pengikatan kolom/pelat desalinasi. Pengambilan sampel oligonukleotida yang disintesis harus dilakukan secara perlahan untuk mencegah bubuk CPG memasuki kolom/pelat untuk dibersihkan dan terjadi kontaminasi silang.
Kolom/wafer desalinasi C18 menggunakan matriks silika, kisaran PH yang berlaku adalah 2-7, PH > 7,5 mudah melarutkan matriks silika, PH
Bila menggunakan TFA untuk menghilangkan garam DMT, perhatikan waktunya, terlalu lama akan menimbulkan efek menghilangkan purin.
Terikat
Kolom Sintesis Frit CPG Universal B&M Teknologi Pemurnian dan Penghilangan Garam yang Cepat
Kolom Sintesis Frit CPG Universal B&M Teknologi Desalinasi dan Pemurnian Cepat:
Frit CPG Universal B&M terbuat dari polietilena ultra-murni dengan berat molekul ultra-tinggi yang diimpor dan bubuk CPG impor, diproses dengan teknologi khusus, memiliki efek sintesis yang baik dalam kolom sintesis, tingkat mutasi yang rendah, dan kualitas produk yang dapat diandalkan.
Setelah sintesis selesai dalam synthesizer seri Dr.Oligo/Mermade dan amonia dilarutkan, Oligo dapat dielusi langsung ke kolom sintesis, dan setelah pemberian dosis dan pengeringan, dapat digunakan untuk reaksi PCR rutin secara langsung tanpa langkah pemurnian tambahan, yang mana mudah dioperasikan, menghemat biaya dan pengiriman lebih cepat!
Langkah-langkah spesifik operasinya adalah sebagai berikut:
1, Sintesis B&M Universal CPG Frits kolom/pelat/s sintetis 400ul, campuran air ultramurni asetonitril 75% dicuci dua kali untuk menghilangkan reagen sisa sintetis;
2, Kolom/Pelat Amolisis Amonia Sintetis Frits CPG Universal B&M, 90°C, 80PSI, Amolisis Amonia 2-2,5 jam;
3, 100% asetonitril 400L cuci kolom/pelat sintetis, dua kali;
4. Campuran Air Ultramurni 90% Asetonitril 400ul Kolom/Pelat Sintetis Pencucian, Dua Kali, Pompa Kering;
5. Volume eluen yang sesuai untuk mengelusi primer pada kolom/pelat sintetis, eluen dapat berupa air ultramurni, dapat berupa campuran air ultramurni trietilamina 3%, juga dapat berupa campuran air ultramurni asetonitril sekitar 20%.
6. Larutan elusi dapat diukur, dibagikan, dikeringkan, dikemas dan dikirim.